ការរកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកវីរុស

លំដាប់ហ្សែននៃមេរោគភាគច្រើនត្រូវបានគេស្គាល់។ការស៊ើបអង្កេតអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរដែលជាផ្នែកខ្លីនៃ DNA ដែលត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីបង្កាត់ជាមួយផ្នែកបន្ថែម DNA ឬ RNA មេរោគ។ប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់វត្ថុធាតុ polymerase (PCR) គឺជាបច្ចេកទេសដែលមានប្រសិទ្ធភាពជាងមុនសម្រាប់ការរកឃើញមេរោគ។វិធីសាស្ត្រវិនិច្ឆ័យរោគឆ្លងខ្ពស់ត្រូវបានបង្កើតឡើងនាពេលថ្មីៗនេះ។

ក. បច្ចេកទេសបង្កាត់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក

ការធ្វើកូនកាត់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក ភាគច្រើនរួមមានការលាបភាគខាងត្បូង (ភាគខាងត្បូង) និង ខាងជើង (ខាងជើង) គឺជាបច្ចេកទេសថ្មីដែលកំពុងអភិវឌ្ឍយ៉ាងឆាប់រហ័សនៅក្នុងផ្នែកវិភាគមេរោគ។ហេតុផលនៃការវិភាគបង្កាត់គឺប្រើផ្នែកខ្លីនៃ DNA (ហៅថា "ស៊ើបអង្កេត") ដែលត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីបង្កាត់ជាមួយផ្នែកបន្ថែម DNA ឬ RNA មេរោគ។តាមរយៈការព្យាបាលដោយកំដៅ ឬអាល់កាឡាំង ខ្សែ DNA ឬ RNA គោលដៅពីរដងត្រូវបានបំបែកទៅជាខ្សែតែមួយ ហើយបន្ទាប់មកត្រូវបាន immobilized នៅលើការគាំទ្រដ៏រឹងមាំមួយ។បន្ទាប់ពីនោះ ការស៊ើបអង្កេតត្រូវបានបន្ថែម និងបង្កាត់ជាមួយនឹង DNA ឬ RNA គោលដៅ។ដោយសារការស៊ើបអង្កេតត្រូវបានដាក់ស្លាកដោយអ៊ីសូតូប ឬនុយក្លេតដែលមិនមែនជាវិទ្យុសកម្ម នោះ DNA ឬ RNA គោលដៅអាចត្រូវបានរកឃើញតាមរយៈ autoradiography ឬដោយប្រព័ន្ធ biotin-avidin ។ដោយសារហ្សែនមេរោគភាគច្រើនត្រូវបានក្លូន និងតម្រៀបតាមលំដាប់ ពួកវាអាចត្រូវបានរកឃើញដោយប្រើលំដាប់ជាក់លាក់នៃមេរោគជាការស៊ើបអង្កេតនៅក្នុងគំរូ។បច្ចុប្បន្ននេះ វិធីសាស្ត្របង្កាត់រួមមានៈ ចំណុចពុះ ការធ្វើកូនកាត់នៅក្នុងទីតាំងនៅក្នុងកោសិកា ឌីអេនអេ បូលធីង (ឌីអេនអេ) (ប៊្លូតខាងត្បូង) និង អេអេអេអេ អេនអេ (អេនអេ) (ប៊្លូតខាងជើង) ។

បច្ចេកវិទ្យា B.PCR

ក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ បច្ចេកទេសពង្រីកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកក្នុង vitro ស៊េរីមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយផ្អែកលើ PCR ដើម្បីធ្វើតេស្តមេរោគដែលមិនមានប្រតិកម្ម ឬមិនអាចដាំដុះបាន។PCR គឺជាវិធីសាស្រ្តមួយដែលអាចសំយោគលំដាប់ DNA ជាក់លាក់ដោយប្រតិកម្មនៅក្នុង vitro polymerase ។ដំណើរការនៃ PCR រួមមានវដ្តកម្ដៅនៃបីជំហាន៖ denaturation, annealing, and extension at high temperature (93℃~95℃), DNA double-stranded ត្រូវបានបំបែកជាពីរ DNA strands តែមួយ;បន្ទាប់មកនៅសីតុណ្ហភាពទាប (37 ℃ ~ 60 ℃), primers nucleotide សំយោគពីរ anneal ទៅផ្នែក DNA បំពេញបន្ថែម;ខណៈពេលដែលនៅសីតុណ្ហភាពសមស្របសម្រាប់អង់ស៊ីម Taq (72 ℃) ការសំយោគនៃខ្សែសង្វាក់ DNA ថ្មីចាប់ផ្តើមពី primer 3'end ដោយប្រើ DNA បំពេញបន្ថែមជាគំរូ និង nucleotides តែមួយជាវត្ថុធាតុដើម។ដូច្នេះបន្ទាប់ពីវដ្តនីមួយៗ ខ្សែសង្វាក់ DNA មួយអាចត្រូវបានពង្រីកទៅជាខ្សែសង្វាក់ពីរ។ការធ្វើម្តងទៀតនូវដំណើរការនេះ ខ្សែសង្វាក់ DNA នីមួយៗដែលបានសំយោគក្នុងវដ្តមួយអាចត្រូវបានប្រើជាគំរូក្នុងវដ្តបន្ទាប់ ហើយចំនួនខ្សែសង្វាក់ DNA ត្រូវបានកើនឡើងទ្វេដងក្នុងវដ្តនីមួយៗ ដែលមានន័យថាការផលិត PCR ត្រូវបានពង្រីកក្នុងល្បឿនកំណត់ហេតុ 2n ។បន្ទាប់ពី 25 ទៅ 30 វដ្តការផលិត PCR ត្រូវបានកំណត់តាមរយៈ electrophoresis ហើយផលិតផល DNA ជាក់លាក់អាចត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្រោមពន្លឺកាំរស្មី UV (254nm) ។សម្រាប់អត្ថប្រយោជន៍នៃភាពជាក់លាក់ ភាពរសើប និងភាពងាយស្រួលរបស់វា PCR ត្រូវបានអនុម័តនៅក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យគ្លីនិកនៃការឆ្លងមេរោគជាច្រើនដូចជា HCV, HIV, CMV និង HPV ។ដោយសារ PCR មានភាពរសើបខ្លាំង វាអាចរកឃើញ DNA មេរោគនៅកម្រិត fg ប្រតិបត្តិការគួរតែត្រូវបានអនុវត្តយ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្នបំផុត ដើម្បីជៀសវាងភាពវិជ្ជមានមិនពិត។លើសពីនេះទៀត លទ្ធផលវិជ្ជមាននៅក្នុងការធ្វើតេស្តអាស៊ីត nucleic មិនមានន័យថាមានមេរោគផ្ទាល់នៅក្នុងគំរូនោះទេ។

ជាមួយនឹងការអនុវត្តយ៉ាងទូលំទូលាយនៃបច្ចេកទេស PCR បច្ចេកទេស និងវិធីសាស្រ្តថ្មីត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយផ្អែកលើបច្ចេកទេស PCR សម្រាប់គោលបំណងសាកល្បងផ្សេងៗគ្នា។ឧទាហរណ៍ PCR បរិមាណពេលវេលាពិតប្រាកដអាចរកឃើញការផ្ទុកមេរោគ។នៅកន្លែង PCR ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណការឆ្លងមេរោគនៅក្នុងជាលិកាឬកោសិកា។PCR ដែលដាក់ក្នុងសំបុកអាចបង្កើនភាពជាក់លាក់នៃ PCR ។ក្នុងចំនោមពួកគេ PCR បរិមាណពេលវេលាពិតត្រូវបានបង្កើតឡើងយ៉ាងឆាប់រហ័ស។បច្ចេកទេសថ្មីជាច្រើនដូចជា TaqMan hydrolysis probe, hybridization probe, and molecular beacon probe, ត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងបច្ចេកទេស PCR quantitative time ដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងការស្រាវជ្រាវគ្លីនិក។ក្រៅពីការកំណត់អត្តសញ្ញាណផ្ទុកមេរោគនៅក្នុងសារធាតុរាវក្នុងខ្លួនរបស់អ្នកជំងឺបានត្រឹមត្រូវ វិធីសាស្ត្រនេះក៏អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីរកមើលសារធាតុដែលធន់នឹងថ្នាំផងដែរ។ដូច្នេះ PCR បរិមាណពេលវេលាពិតប្រាកដត្រូវបានអនុវត្តជាចម្បងនៅក្នុងការវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពព្យាបាល និងការឃ្លាំមើលការអត់ធ្មត់ថ្នាំ។

គ. ការរកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីករបស់មេរោគតាមរយៈកម្រិតខ្ពស់

ដើម្បីបំពេញតាមតម្រូវការសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃជំងឺឆ្លងថ្មីៗ វិធីសាស្ត្ររកឃើញកម្រិតខ្ពស់ផ្សេងៗ ដូចជាបន្ទះសៀគ្វី DNA (DNA) ត្រូវបានបង្កើតឡើង។សម្រាប់បន្ទះសៀគ្វី DNA ការស៊ើបអង្កេតជាក់លាក់ត្រូវបានសំយោគ និងភ្ជាប់ទៅនឹងបន្ទះសៀគ្វីស៊ីលីកុនតូចៗក្នុងដង់ស៊ីតេខ្ពស់ដើម្បីបង្កើតជា DNA probe microarray (DNA) ដែលអាចត្រូវបានបង្កាត់ជាមួយគំរូ។សញ្ញានៃការបង្កាត់អាចត្រូវបានរូបភាពដោយមីក្រូទស្សន៍បង្រួបបង្រួម ឬម៉ាស៊ីនស្កេនឡាស៊ែរ ហើយត្រូវបានដំណើរការបន្ថែមទៀតដោយកុំព្យូទ័រ ហើយសំណុំទិន្នន័យដ៏ធំដែលទាក់ទងនឹងហ្សែនផ្សេងៗគ្នាអាចទទួលបាន។បន្ទះឈីប DNA មានពីរប្រភេទ។"បន្ទះឈីបសំយោគ" មានដូចខាងក្រោម: oligonucleotides ជាក់លាក់ត្រូវបានសំយោគដោយផ្ទាល់នៅលើបន្ទះសៀគ្វី។មួយទៀតគឺបន្ទះឈីប DNA pool ។ហ្សែនក្លូន ឬផលិតផល PCR ត្រូវបានបោះពុម្ពជាលំដាប់នៅលើស្លាយ។អត្ថប្រយោជន៍នៃបច្ចេកវិទ្យាបន្ទះឈីប DNA គឺការរកឃើញក្នុងពេលដំណាលគ្នានៃចំនួនដ៏ច្រើននៃលំដាប់ DNA ។កំណែចុងក្រោយបំផុតនៃបន្ទះឈីបរាវរកមេរោគអាចកំណត់អត្តសញ្ញាណមេរោគរបស់មនុស្សជាង 1700 ក្នុងពេលតែមួយ។បច្ចេកវិទ្យាបន្ទះឈីប DNA បានដោះស្រាយបញ្ហានៃវិធីសាស្រ្តបង្កាត់អាស៊ីត nucleic បែបប្រពៃណី និងមានកម្មវិធីទូលំទូលាយក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យមេរោគ និងការសិក្សាអំពីរោគរាតត្បាត។